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    安捷倫氣相色譜儀圖文詳解的詳細資料

     

    氣相色譜儀

     什么是氣相色譜儀

      本章介紹氣相色譜儀的功能和用途,以及色譜儀的基本結構。
        氣相色譜(GC)是一種把混合物分離成單個組分的實驗技術。它被 用來對樣品組分進行鑒定和定量測定》
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      基子時間的差別進行分離
      和物理分離(比如蒸餾和類似的技術)不同,氣相色譜(GC)是 基于時間差別的分離技術。
      將氣化的混合物或氣體通過含有某種物質的管,基于管中物質對 不同化合物的保留性能不同而得到分離。這樣,就是基于時間的 差別對化合物進行分離。樣品經過檢測器以后,被記錄的就是色 譜圖(圖1),每一個峰代表初混合樣品中不同的組分。
      峰出現的時間稱為保留時間,可以用來對每個組分進行定性,而 峰的大?。ǚ甯呋蚍迕娣e)則是組分含量大小的度量。
      圖1典型色譜圖

    系統

      一個氣相色譜系統包括
      可控而純凈的載氣源.它能將樣品帶入GC系統 進樣口,它同時還作為液體樣品的氣化室 色譜柱,實現隨時間的分離
      檢測器,當組分通過時,檢測器電信號的輸出值改變,從而對 組分做出響應
      某種數據處理裝置 圖2是對此作出的一個總結。
      樣品
      載氣源 一^ 進樣口一^ 色譜柱 一^ 檢測器一_ 數據處理」

      圖2色譜系統

    氣源

      載氣必須是純凈的。污染物可能與樣品或色譜柱反應,產生假峰 進入檢測器使基線噪音增大等。推薦使用配備有水分、烴類化合 物和氧氣捕集阱的高純載氣。見圖

    鋼瓶閥

      若使用氣體發生器而不是氣體鋼瓶時,應對每一臺GC都裝配凈 化器,并且使氣源盡可能靠近儀器的背面。
      進樣口
      進樣口就是將揮發后的樣品引入載氣流。較常用的進樣裝置是注 射進樣口和進樣閥。 注射進樣口

      用于氣體和液體樣品進樣。常用來加熱使液體樣品蒸發。用氣體 或液體注射器穿透隔墊將樣品注入載氣流。其原理(非實際設計 尺寸)如圖4所示。

    樣品從機械控制的定量管被掃入載氣流。因為進樣量通常差別很 大,所以對氣體和液體樣品采用不同的進樣閥。其原理(非實際 設計尺寸)如圖5所示。

    進樣閥通常與進樣口連接,特別在分流進樣模式時,進樣閥連接 到分流/不分流進樣口。

      色譜柱
      分離就在色譜柱中進行。因為用戶可以選擇不同的色譜柱.故使 用一臺儀器能夠進行許多不同的分析。
      圖

      因為大多數分離都強烈依賴于溫度.故色譜柱要安裝在能夠精密 控溫的柱箱內.見圖6。

    從色譜柱里出來的含有分離組分的載氣流通過檢測器而產生信號。 檢測器的輸出信號經過轉化后成為色譜圖,見圖

      檢測器有幾種類型的檢測器可供選擇,但是所有的檢測器的功能都是相 同的:

      當純的載氣(沒有待分離組分)流經檢測器時,產生穩定的電 信號(基線
      當有待分離組分通過檢測器時.產生不同的信號。
      數據處理
      測量
      色譜圖記錄下了檢測器輸出的電信號。它可以通過以下幾種方式 進行處理:
      在帶狀圖記錄儀上記錄 使用數字積分儀處理 用計算機數據系統處理
      傳統的帶狀圖記錄儀必須手工測量峰的保留時間和峰大小。積分 儀和數據系統則可直接進行這些測量。強烈推薦使用積分儀和數 據系統,因為它們有很好的重現性和靈敏度。
      計算
      色譜峰的保留時間和峰大小必須轉換成待分離組分的名稱和含量。 這可以通過與已知樣品(校準樣品)的保留時間和響應值大小進 行比較來完成。這種比較可以手工完成.但是鑒于速度和準確性. 采用數據處理系統是更好的。
      儀器控制
      某些數據系統和GC組合還可通過數據系統計算機提供對GC的直 接控制。這樣就能創建可存儲的方法.需要時調用儲存的方法即 可.從而可實現高度的自動化分析。一些樣品已經是氣體(例如室內或室外的空氣,可燃氣體等), 則可以用氣體注射器或氣體進樣閥直接進樣。
      大多數樣品為液體,為了用氣相色譜來分析,必須首先使之氣化 這常常由加熱的進樣口和液體注射器或液體進樣閥相結合而完成的
      進樣口
      進樣口的設計和選擇取決于色譜柱的直徑和類型。下一章將介紹 色譜柱類型,填充柱和毛細管柱。
      填充柱和大口徑毛細管柱使用填充柱進樣口;小口徑的毛細管柱 使用分流/不分流進樣口。
      填充柱進樣口
      填充柱進樣口是為填充柱設計的??筛鼡Q的襯管使進樣口適用于 特定內徑的色譜柱,柱內徑一般為1/8或1/4英寸。典型的設計 如圖8所示。

      當用大口徑毛細管柱時,的襯管使得它們可以用于填充柱進 樣口。這種色譜柱的柱容量與填充柱的類似。

    樣品用注射器穿過隔墊注入到載氣流中。加熱的進樣口使樣品 (如果是液體)氣化,而后載氣將氣化的樣品帶入色譜柱。分流/不分流進樣口

      分流/不分流進樣用毛細管柱,有兩種操作模式。 分流模式
      毛細管柱有較小的樣品容量。進樣量必須非常少.通常遠少于1 微升,以防止色譜柱超載。

    9為典型的分流/不分流進樣口的分流模式。

        分流閥開啟并一直維持此狀態。樣品被注射進襯管,同時被氣化。 氣化的樣品在色譜柱(氣流阻力大)和分流放空口 (氣流阻力可 調)之間分配。
      不分流進樣模式
      此模式特別適用于低濃度的樣品。它將樣品捕集在柱頭,同時將 殘留在進樣口的溶劑氣體放空。
      此模式包括兩個步驟- 1注射樣品
      關閉分流閥。載氣流在隔墊吹掃氣出口和色譜柱之間分配。柱 頭壓力由分流放空調節閥來設定,從而設定流過色譜柱的流速。
      注射樣品。溶劑(主要的樣品成分)在富集樣品的柱頭產生飽 和區帶。
      進樣口流量 隔墊螺母隔墊吹掃
      控制閥和隔墊氣控制

    進樣口吹掃

      在樣品被捕集到色譜柱頭之后,打開分流閥。將殘留在進樣口 中的氣體(此時大部分是溶劑)放空。
      現在流路和分流模式是相同的(圖9)。
      升高柱溫,開始將樣品組分引入色譜柱并分離。
        此方法對于沸點比溶劑高的組分的分離是很有效的。溶劑峰將會 很大。要采用程序升溫將目標化合物的峰和溶劑峰分離。不分流模式進樣步驟
      成功的不分流進樣包括以下幾個步驟:
      在加熱的進樣口中使樣品和溶劑揮發。
      采用較低的柱溫在柱頭產生一個溶劑飽和區帶。
      利用此區帶使樣品在柱頭進行富集和重組。
      在所有樣品,或至少是大部分樣品進入色譜柱后,通過打開分 流放空閥放空進樣口中殘留的樣品氣體。
      升高柱溫,先將溶劑,然后將樣品從柱頭釋放。 操作參數初始值設定
      您必須通過實驗來確定更好操作參數值。表1提供了一些建議的 參數設置初始值:
      表1 不分流進樣模式的進樣口參數初始值設置
      儀器參數建議初始值
      柱溫低于溶劑沸點
      柱箱初始時間>分流閥開啟時間
      分流放空閥開啟時間襯管體積< 2/柱流速
      注射進樣技術每一個色譜峰的起始點是與載氣混合的揮發的樣品區域的一部分 在樣品組分于柱內被分離的過程中,樣品區域由于擴散而展寬。 任何色譜峰的寬度都不會比初始區域寬度更窄。 由于分離窄峰比寬峰容易得多.故必須使初始區域寬度小化。 理想的注射進樣技術是:
      將樣品充入注射器,調節進樣量。
      將注射器的針尖以盡可能深地速度穿過進樣隔墊(進樣口的設 計者假定您會這樣做)。
      快速壓下注射器推桿。
      立即把針從進樣口拔出。
      重要的就是速度》任何遲疑都將導致樣品區域寬度增大。
      如果一個熟練的操作者按以上方法進樣,他能達到3到4%的進樣 量重復性。能夠限制注射器推桿移動距離的機械裝置能提高進樣 重復性。
      應避免使用在兩個氣泡間捕集樣品的注射技術。這樣您必須做兩 次估算,因而使進樣量的誤差增倍。
      自動進樣的優點
      自動進樣器是解決進樣問題的一個方法。它們能夠實現高度重復 的進樣。因此,它們通常允許采用更簡單的峰的含量計算方法 (用外標法,而不是內標法)。
      如果配備有自動進樣器(裝備有樣品盤.并與數據系統連接). 就可以進行全自動分析。
      氣體樣品進樣閥包括一個定量管和將定量管接入載氣流和脫離載 氣流的閥體。

    樣品量通過定量管來確定。定量管是可以更換的,因此一個進樣 閥能夠提供多種高度重復的進樣體積。

      液體進樣閥
      這與氣體進樣閥的原理是一樣的。由于液體進樣要求更小的進樣 體積,因此“定量管”是構成閥體的一部分,且是不可更換的。
      如果要改變進樣量,您必須更換整個進樣閥。進樣口溫度
      氣體樣品
      對于氣體樣品而言.進樣口不需要氣化任何物質.因此也就沒有 必要加熱。
      然而.大多數色譜工作者更傾向于加熱進樣口以保證進樣口不會 使任何物質冷凝。常用的進樣口溫度為10(TC。
      液體樣品
      液體樣品要求加熱進樣口。溫度要足夠高以使樣品氣化.但又不 能過高而導致樣品分解。
      溫度足夠髙開始將進樣口溫度設置為溶劑沸點值并觀察色譜峰 形。如果所有色譜峰的峰形大致相同(大小不同),說明進樣口 溫度已經足夠高了。如果后流出的色譜峰顯得過寬,就將進樣口 溫度升高10 'C看峰形是否改善。
      溫度過高如果出現的峰數比組分數還多,且峰型較差,說明可 能有樣品分解發生。
      在進樣口發生分解所產生的峰,其大小主要取決于進樣口溫度。 為了驗證是否發生分解,稍稍降低進樣口溫度后進行第二次分析, 然后比較峰的大小。若有明顯的變化,就表明在進樣口處有樣品 分解發生。
       氣相色譜原理
      組分分離
      色譜柱如何對化合物進行分離
        混合物在色譜柱內被分離為單個組分。許多色譜柱都可以用來分 離混合物。色譜柱的選擇取決于混合物的性質和所需獲得的信息 (分析目的)》然而,所有色譜柱都基于同樣的工作原理。
      色譜柱如何對化合物進行分離
      這是一段含有兩個樣品組分(彩色的圓點)的色譜柱的橫截面, 它既沒有填料,也沒有涂層。這樣的色譜柱只是空柱(圖

    12 未經涂層的色譜柱

      如果過幾秒鐘后您再觀察,色譜柱內的情況就發生了改變 (圖
      圖13 幾分鐘后
      由于載氣流的帶動,樣品向柱的右端移動。并且由于樣品區域和 周圍載氣中樣品濃度的不同而使得樣品區帶展寬。
      樣品組分仍然是混合在一起的。
      現在我們在柱子的內表面涂一層高沸點物質,然后重復此實驗     我們可以用所希望的任何涂層。在這個例子中,我們選用能夠溶 解蘭色圓點組分而不能溶解黃色圓點組分的固定液。
      蘭色組分在固定相和載氣兩相之間進行分配。黃色組分則停留在 氣相中。
      幾秒鐘以后我們再觀察色譜柱.我們會發現(  黃色組分與涂層之間沒有作用》它隨載氣一同流過色譜柱并首先 從色譜柱中流出。
      蘭色組分在固定液和載氣之間進行分配。它以較慢的速度流過色 譜柱而后流譜柱。
      樣品已經開始分離為兩個峰。
      色譜基本原理
      當氣化的組分與氣相和固定(涂層)相共存時.它就根據對兩 相相對吸附性能的不同而在兩相間進行分配。
      此“吸附性能”可以是溶解度,揮發性,極性,特殊的化學相 互作用,或其他任何存在于樣品組分間的性質差異。
      如果一相是固定的(涂層)而另一相是流動的(載氣),組分 將會以比流動相慢的速度遷移。遷移速度慢的程度取決于相互 作用的大小。
      如果不同組分有不同的“吸附性能”,它們將會隨時間而被分離。
      毛細管柱是將固定相涂在管內壁的開口管.其中沒有填充物。

    16 毛細管柱

      毛細管柱產生很窄的色譜峰。這有利于分離非常復雜的混合物。 例如,常用的汽車燃油的分析將產生400到500個色譜峰。
      色譜柱類型
      毛細管柱
      這些用熔融石英毛細管制成的色譜柱呈很好的惰性。在不銹鋼和 玻璃柱上拖尾現象很嚴重的樣品,如硫醇類化合物,在毛細管柱 上能夠達到基線分離。
      填充柱
      毛細管柱對樣品量的要求小于填充柱。特定的進樣口,見19頁 “分流/不分流進樣口”,允許采用常規進樣量而在樣品進入色譜 柱之前進行分流。

    填料上的涂層

      填充柱
      圖
      填充柱有較大的樣品容量.是老式的靈敏度較低的檢測器所必需 的。然而.采用現代高靈敏度的檢測器.樣品容量大的優勢已經 消失。填充柱仍然適用于氣體樣品.但是.毛細管柱對于大多液 體樣品會有更好的分離度。
      色譜柱管材
      色譜柱管材料包括:
      不銹鋼一耐用,但是相對活潑的柱表面可能導致被分離組分的 損失和峰拖尾。
      玻璃一質脆,通常要求對內表面進行脫活處理。
      熔融石英一僅用于毛細管柱.惰性好、堅固耐用.是較常用的 柱材料。色譜柱特性
      色譜柱的用途是將多組分的樣品分成窄的、分離良好的色譜峰 這兩個目標并不是完全無關的。
      柱效
      高柱效的色譜柱產生窄的色譜峰。見圖
      低柱效高柱效

    柱效是由色譜柱的結構(小的柱內徑和薄的固定相涂層有高的 柱效)和載氣流速決定的。

    2 推薦的載氣流速

        注:較低的流速接近于載氣與色譜柱的優化值。通常.色譜柱運 行得更快.分析就更迅速.而不會損失多少柱效。如果分離非常 好或使用更短的色譜柱.色譜柱甚至還可以運行得更快。大多數 情況下.不用低于推薦值的流速.因為它們延長分析時間.還會 降低柱效。
      載氣控制
      填充柱內的流速通常是用質量流量控制器來控制的。毛細管柱, 由于它的流速很低.常常是用壓力來控制流速的。
      有些GC提供電子氣路控制。這樣的儀器允許從鍵盤上設定流速 并從顯示器上讀出。
      柱分離度
      高分離度的色譜柱能夠作到基線分離。如果色譜峰很窄(柱效 高),分離將會更容易實現。
      載氣流速的稍微改變能對分離度產生顯著的影響。
      結合柱效和分離度的數學定義式,我們可以得到重要的結論:
      色譜柱分離度與柱長的平方根成正比。
      這意味著增加柱長并不是提高分離度行之有效的方法。柱長加倍,分 離時間(和色譜柱成本)也加倍,但是分離度僅僅增加大約40%。
      柱選擇性
      這是一個定義不很明確的、與固定相有關的性質。事實上,它是 固定相對兩種化合物表現出不同作用的程度。選擇性低一兩組分 同時流出。選擇性高一兩色譜峰分離。用毛細管柱還是填充柱
      兩者各有所長。下面是一些需要考慮的因素。
      氣體分析通常用填充柱完成。填充柱有足夠的柱容量來適應較 大體積的氣體進樣量。氣體樣品分析常用填料包括:
      分子篩一氧氣,氮氣,氦氣,氫氣,二氧化碳,一氧化碳, 甲烷等。
      氧化鋁一丙烷或更大分子量的化合物
      多孔性聚合物微球(Porapaks) -乙烷,丁烷,二氧化碳等。
      其中一些填料(但不是所有填料)可以用于毛細管色譜柱中。
      毛細管柱有比填充柱更高的分離度。即使選擇性低一些,通常 也能實現足夠的分離。
      一根毛細管柱能夠完成多種分析,而用填充柱則可能需要多根 才能完成。
      對毛細管柱和填充柱都適用的的固定液有: 甲基硅烷一非極性到中等極性
      苯基甲基硅烷(5到50%的苯基)一烯烴,芳香化合物, 中等極性化合物
      聚乙二醇)_酸,強極性的物質
      由于毛細管柱高的分離度,通??梢誀奚稽c分離度而減少分 析時間。由于分離度與柱長的平方根成正比,因此一根良好的 毛細管柱可以被截成兩段很好的毛細管柱,而僅損失很少的分 離度。分離時間卻可以減少一半!
      柱溫
      色譜柱內的固定相(涂層)有一個適用的溫度范圍。
      漫菇溫度通常是熔點。低于此.您所做的是氣/固色譜;高于 此,您所做的是氣/液色譜。結果可能大不相同。
      漫暮溫度通常是指沸點或降解溫度。
      色譜柱通常安裝在可控溫的柱箱里,因為溫度對分離的影響是很 大的。
      溫度

    這是操作柱溫箱較簡單的方法。在整個分析過程中,柱溫將保持 不變。它有以下優點

      柱溫箱總是處于可進行樣品分析的狀態。
      兩次分析之間不需要間隔時間。
      缺點:
      若樣品組分的沸點范圍很寬,那么恒溫分離將會需要很長時間, ?由于色譜峰隨時間而展寬,后面流出的峰將會難于檢測或測定。
      程序控溫
      在分析過程中,柱溫隨時間而變化,通常是升高柱溫。它的優點是: ?減少分析時間
      整個分離過程中峰形*,檢測和測定更容易。 缺點:
      樣品組分將經歷比恒溫分離更高的溫度,這可能會導致某些敏 感組分降解。
      在兩次進樣之間.柱溫箱必須冷卻到初始溫度。這樣就抵消了 部分所節省的分析時間。
       氣相色譜儀原理
      組分檢測
      熱導檢測器
      工作原理 40 火焰離子化檢測器(
      工作原理 42 電子捕獲檢測器(ECD) 43 工作原理
      本章所介紹的三種檢測器能夠完成GC的大部分工作。還有其他 一些檢測器起互補作用(見表3),大多是元素專屬性檢測器或 質量選擇性檢測器,在這里將不對它們做詳細介紹。

    熱導檢測器

      所有氣體都能夠導熱,但是氫氣和氦氣的熱導系數大(見 表4)。當兩者任何一種作為載氣時,任何其他成分的存在都將導 致熱導檢測池中氣流熱導率的下降。
      用TCD可以測量這種變化,并用來創建色譜圖。

    氣體相對熱導系數

        由于TCD是基于熱導率的差異而工作的,故氫氣或氦氣顯然是優 選的載氣。
      工作原理
      當電壓施加于熱絲時.它就發熱。穩定的溫度取決于所施加的電 壓、熱絲的電阻和熱絲向周圍環境散熱的速率。
      如果熱絲被載氣所包圍.載氣熱導率的任何變化都會引起熱絲溫 度的改變。這樣就導致熱絲電阻的變化。早期的TCD設計是將四根熱絲連接成惠斯通電橋。柱流出物流經 兩根相對的熱絲;純的載氣(參比氣)流過另外兩根熱絲。當有 被分離樣品組分流譜柱進入檢測器時,電橋的平衡被破壞。

    此檢測器只用一根熱絲??焖偾袚Q閥使得柱流出物(含樣品)和 參比氣交替通過檢測池。如果兩氣流是一樣的一沒有被分離的組 分,氣體切換時熱絲電阻不變。

      然而,在有樣品組分進入檢測池時,切換到色譜柱流出氣時,熱 絲溫度降低;當切換到參比氣時,熱絲溫度又恢復原值。電子傳 感器能夠探測到此變化并調節熱絲的電源供給以使溫度保持恒定。
      圖20 熱導檢測器
      電源供給變化曲線的波動幅度取決于柱流出物(有組分存在時) 和參比氣之間熱導率的差異?;鹧骐x子化檢測器
      氫氣和空氣燃燒所生成的火焰產生不多的離子。然而有含碳有機 物進入火焰中燃燒時,離子產率將增大。
      工作原理
      從色譜柱流出的載氣和氫氣混合后在空氣中燃燒。FID有兩個電 極,其中之一是火焰燃燒的噴嘴,另一個加上極化電壓后用來收 集火焰中的離子。
      當組分進入火焰時,收集極所記錄到的電流增大。該電流經過放 大后形成色譜圖。

    對在火焰中產生離子的任何物質都有響應,幾乎包括所有有 機化合物(有少數例外)。

      通用的FID設計如圖21所示。
      空 極焰 放電火
      電子捕獲檢測器(
      電子捕獲檢測器廣泛應用于環境分析領域,這是因為它對含鹵素 化合物有很高的靈敏度,包括大部分除草劑和農藥。
      工作原理
      檢測池中的放射性同位素,通常是63Ni,發射出0射線。^射線和 載氣分子碰撞而產生低能量的自由電子。在兩電極間施加極化電 壓以捕集電子流。
      某些分子能夠捕獲低能量的自由電子而形成負離子。當此類化合 物分子進入檢測池時,部分電子被捕獲從而使得收集電流下降。 信號經過處理后形成色譜圖。

    是高度選擇性的檢測器:對能捕獲電子的物質有高的靈敏 度,而對其他物質則幾乎不響應。一些相對響應值見表5。

    化合物相對于苯(響應值=1)的響應值

       氣相色譜基本原理
       譜圖解析

    23 典型色譜圖

      色譜圖可以通過手動或電子處理方式轉化為峰保留時間或峰大小 的數據列表。色譜峰測量
      對于一個色譜峰,我們可以獲得兩個基本的測量數據- ?進樣后到色譜峰被檢測到的時間 ?色譜峰的大小
      保留時間
      峰出現的時間是從開始進樣到被檢測到的時間,包括兩部分:
      一載氣流過色譜柱所用的時間??赏ㄟ^注射空氣或其他
      沒有相互作用的物質來測定。
      保留時間一由于被分離組分與色譜柱固定相相互作用所造成的 滯留時間。
      在大多數情況下.通常忽略死時間而把出峰時間認為是保留時間。
      色譜峰大小
      色^峰大小可以通過峰高或峰面積來測定,二者都是相對于基線 而言的。
      色譜峰下的基線不能直接測量。它必須從色譜峰兩側的基線處測量
      對于分離良好的峰這是很簡單的。但是當峰發生重疊,或出現在 溶劑峰的拖尾側,或其他非理想化的情況時,測量就比較困難一 些。鑒于此,花在改善峰分離條件上的時間是值得的。
      峰高
      這是較簡單的測量,僅僅需要一把測量尺。它是從峰尖到基線的 垂直距離。
      峰面積
      此面積是指由色譜峰信號曲線和基線所圍成的面積。通過電 子方式來測量。

    測量基線

      圖24 色譜峰測量
      積分儀和數據系統
      積分儀用來測量色譜峰的面積和峰高.以及峰保留時間。它們能 夠方便而重現地將曲線(色譜圖)轉換為表格(時間和大?。?。
      數據處理系統不僅有積分儀同樣的優點.而且具有更多的功能:
      軟件控制的積分儀比機械的積分儀更靈活。
      不用重復進樣,可以采用不同的積分和計算參數對數據進行再 處理。
      系統能夠更加精確的完成本章所介紹的幾種基本的計算。 ?系統能夠給出用戶所需要的報告格式。 ?色譜峰的校準變得非常簡單。 既可以進行一點.也可以進行多點校準。 ?原始數據和已處理的數據可以被保存以備后用^ ?系統可以同時處理多臺氣相色譜儀的數據。
      因為許多化合物可能在同一時間(或幾乎同一時間)流譜 柱,因此僅僅依靠氣相色譜本身是不能對一個完全未知的化合物 進行定性的。
      然而,當問題被加以限定時,氣相色譜將變成一個強有力的工具。 可以通過比較氣相色譜圖以確定樣品是否相同。例如,油輪里的原油樣品可以和海上浮油比較以確定油輪是否應對原油的泄漏負責。
      對于排除可疑性是很有用的。如果您從先前的實驗中知道異辛 烷在1.9分鐘出峰,那么一個在1.5分鐘出的峰一定不會是異辛 烷。那么它是什么呢?
      幸運的是,您不必要考慮所有的有機化合物。樣品信息限定了可 能的化合物。例如,您不會期望在止痛藥中找到鏈霉素。
      當一個未知的峰被初步確定后,還必須在別的不同性質的色譜柱 上重現以得到確認。如果一個化合物在基于沸點分離的柱(甲基 硅氧烷)和極性柱(聚乙二醇)上有正確的保留時間,此定性很 可能就是正確的。
      在處理已知樣品組分并且要求定量時是特別有用的。GC通常 也用來監測雜質組分的存在(作為額外峰)。
      組分定性
      后.GC可以和質譜或其他選擇性檢測器聯用以提供明確鑒定 未知組分所需的輔助數據。組分定量
      未校準計算
      當載氣通過檢測器時將會產生信號。如果沒有樣品組分存在.所 產生的信號是基線。當有組分出現時,信號將會增強。
      當組分通過時.信號和其投影的基線所圍面積是峰面積。從色譜 峰頂到投影的基線的大垂直距離是峰高。
      積分伩或數據處理系統負責處理繪制基線和測量峰面積和峰高這 項困難的任務。其結果就是測量的響應值(MR)。
      峰面積與峰高百分比法
      在一次進樣分析過程中每一個色譜峰所占總的峰面積或峰高的百 分比。
      假設檢測器對所有組分都有相同的響應。計算公式見公式1。 第n個峰含量
      第n個峰的MR/_次進樣的所有MR的和
      優點:
      快速,因為不需要進行校準。 ?進樣量在一定范圍內變化不影響結果。
      缺點:
      所有組分的色譜峰必須能夠檢測到。
      任何沒有被檢測到或有沒流譜柱的峰都會減少MR的總 和。這會造成所有被測物質含量值偏高。如果組分的響應因子不同,未校準計算的結果是不準確的。這會 造成早流出的峰的測得含量偏高。
      適用范圍
      為建立校準表而列出響應信號和保留時間。 ?要進行快速分析,與設定的極限值比較,結果重現。 ?用于過程監測,產品檢驗測試等。 ?不能用于對準確度要求高的分析。校準計算
      如果峰面積和峰高百分比定量不能滿足需要,就要用標準樣品分 析所得數據進行校準計算,以建立單個色譜峰的定量校準曲線。
      較簡單的校準是響應因子,它是通過已知組分的含量除以相應峰 的大小來計算的。
      用圖表示,響應因子是組分含量對色譜峰大小曲線的斜率,如 圖邸所示。
      色譜峰大小

    響應因子可通過分析一個含有所有欲校準組分的標準混合溶液來 進行測定。

      但是,響應因子方法有兩個假設的前提條件: ?含量/峰面積(峰高)曲線經過原點。 ?含量/峰面積(峰高)曲線是直線。
      對于一個可靠的校準,兩個前提條件都必須通過實驗來加以證明 如果曲線確實是一條直線且確實通過原點,則響應因子是有效的
      在圖25中,響應因子可用于色譜峰A和B,但不適用于色譜峰C。 兩種形式的定量校正用公式2和公式3來表示。
      對于色譜峰A和
      峰的CR值=峰旳MR值X色譜峰響應因子⑵
      對于色譜峰
      峰的CR值=色譜峰MR值旳<響應曲線量>⑶
      色譜峰C只有用整個校準曲線進行校正。手動進行這樣的處理是 很費時的,但是用數據處理系統就很容易做到了。歸一化法
      歸一化百分比法與面積和峰高百分比法類似,但是要用校正的響 應值(CR)代替測量的響應值,如公式4所示。
      第n個色譜峰含量
      第n個色譜峰的CR值/所有峰的CR之和]X 100⑷
      此計算方法可對組分靈敏度差異進行校正,這對流出早的色譜 峰的計算結果更加準確。
      進樣量在一定范圍內變化不影響結果。 缺點:
      此方法必須經過校準。
      所有的峰都必須能被檢測。任何沒有被檢測到或有沒流譜 柱的峰都會減少CR的總和。這會造成所有被測物質含量值偏高。
      所有的峰都必須被鑒定和校準,以求達到高的準確度。未知 的(故未校準)峰將會降低校準的準確度。
      適用范圍
      如果沒有高沸點化合物存在,就可給出非常準確的結果。 外標法
      外標法大的優點是只對目標化合物的色譜峰進行校準即可。其 計算非常簡便;見公式5。
      第n個色譜峰含量=第n個色譜峰的CR值(
      優點:
      只需對目標化合物進行校準。 ?只需目標化合物流譜柱并被檢測即可。 ?每一個校準的峰都是獨立進行計算的。
      缺點:
      必須對目標化合物進行校準。
      外標法假定儀器漂移是可以忽略的。必須定期用已知測試樣進 行測試以確證這一點。
      因為外標法是計算而非相對計算,因此恒定的進樣量是至 關重要的。用手動進樣很難保證這一點。實際上,氣體或液體 進樣閥,或自動液體進樣器是必須的。
      適用范圍
      使用進樣閥進行氣體分析。隨著儀器穩定性能的提高.借助于自 動進樣裝置保證恒定的進樣量,外標法已經取代了許多過去要求 用內標法來測定的分析工作。
      內標法
      內標法對每一個色譜峰提供獨立的計算。它同時還對進樣量的波 動、儀器漂移和其他影響因素進行校正。
      雖然隨著現代儀器的發展外標法有很大的改進,但是內標法仍被 認為是準確的色譜定量方法。
      內標法的基本計算公式見公式6。
      第n個峰的含量
      第n個峰的CR值/內標峰的CR值I X內標峰旳含量
      內標、峰的含量是在分析之前加在待測樣品中的已知內標化合物
      的含量。
      這通常被認為是較為準確的定量方法。
      只需對目標化合物進行校準。 只需目標化合物流譜柱并能夠檢測到》 ?每一個校準峰是獨立計算的。 ?進樣量微小的變化不影響測定結果。 ?微小的儀器漂移不影響測定結果。
      缺點:
      必須對目標峰進行校準。 ?每個樣品中必須加入已知量的內標化合物。
      適用范圍
      要求高準確度的液體樣品分析。
      注釋
      內標一詞有兩個稍有區別的含義
      外標法原本是為了補償手動進樣所引起的進樣量誤差而開發 的。為了達到此目的,內標化合物在樣品前處理(萃取、蒸 餾,等等)完成后加到將要進樣的樣品中去。對內標物的主要 要求是樣品中不含有該物質,同時內標化合物能夠產生與樣品 組分完全分離的、峰形很好的色譜峰。內標物不必和樣品組分 的化學性質相似。
      在許多生化分析和相關的應用中,內標化合物是在樣品處理之 前加入到原始樣品中去。在這種情況下,內標化合物的化學性 質必須和樣品相似,以保證前處理步驟對內標物和樣品組分有 相同的影響。此時,內標物用來對兩種不同的因素進行較正: 在預處理過程中樣品回收量的誤差和進樣時樣品量的誤差。用 單一內標物是不可能實現這兩個目的的。通過精確控制樣品預 處理過程和用實驗來證明回收率是高度重現的,那么誤差可以 減少至可接受的程度。

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